培養を成功させるための根幹は、正確な分量比率と徹底した温度管理にあります。基本となるEM活性液の作り方は、清潔なペットボトル（500ml〜2L）を用意し、空気をできるだけ遮断する「嫌気状態」を作ることが原則です。
材料の配合比率において、もっとも標準的なEM活性液 糖蜜 割合は、全体の容量に対して「EM1号：5%」「糖蜜：5%」「水：90%」です。例えば2リットルのペットボトルで作る場合、水約1.8Lに対し、EM1号を100ml、糖蜜を100ml（約140g）投入します。糖蜜が硬くて溶けにくい場合は、あらかじめ40℃程度のぬるま湯でしっかり溶いてからボトルに注ぎ入れます。
仕込みの手順は以下の通りです：
1. 少量の温水（40℃前後）に糖蜜を完全に溶かす。
2. ペットボトルに溶かした糖蜜、EM1号、カルキを抜いた水を注ぎ、ボトルの肩口まで満たす。
3. キャップをしっかり閉めて上下によく振って均一に混ぜる。
4. 30℃〜35℃に保てる環境に設置し、7日〜10日間静置する。
特に難易度が上がるのがEM活性液 冬の培養 温度の確保です。気温が15℃を下回る冬場に室温のまま放置すると、発酵が進まず雑菌が優位になって腐敗します。冬季は、発泡スチロール箱にペットボトルを入れ、ペット用ヒーターや熱帯魚用保温マット、湯たんぽを併用して庫内温度を常時30℃前後に保つ工夫が欠かせません。発酵途中に炭酸ガスが発生してボトルがパンパンに膨らんだら、キャップをわずかに緩めてガス抜きを行い、すぐに再度密閉します。
