ルミネ新宿2の象徴とも言えるのが、7階に位置する常設劇場「ルミネtheよしもと」です。吉本興業の所属芸人による漫才、コント、新喜劇などが毎日上演されており、首都圏におけるお笑いカルチャーの発信拠点として機能しています。
劇場へは、館内のエレベーターを利用して7階へ直接上がります。チケットは事前予約（FANYチケット等）が基本ですが、当日券が用意されている公演もあります。館内での買い物レシートを提示することで特定サービスが受けられるキャンペーンが実施されることもあり、「お笑い鑑賞の前にカフェで休憩し、終演後に下層フロアでショッピングを楽しむ」というルミネ2ならではの回遊動線が確立されています。
